1、监测内容：

空气悬浮粒子数（非生物活性）

微生物（有生物活性）

——环境浮游菌

——环境沉降菌

——表面微生物（关键检测台面、人员操作服及5指手套等）

2、监测方法：

悬浮粒子：《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》（GB/T16292-2010）

浮游菌：《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》（GB/T16293-2010）

沉降菌：《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》（GB/T16294-2010）

表面微生物（环境、设备和人员）

接触碟法：将充满规定的琼脂培养基的接触碟对规则表面或平面进行取样，然后置合适的温度下培养一定的时间并计数，每碟取样面积为约25cm²，微生物计数结果以CFU/碟报告。

擦拭法：用于不规则表面的微生物监测，特别是设备的不规则表面。擦拭法是采用合适尺寸的无菌模板或标尺确定擦拭的面积，取样后，拭子置合适的缓冲液或培养基中，充分振荡，再用适宜的方法计数，每个拭子取样面积为约25cm²，微生物计数结果以CFU/拭子报告。

表面微生物测定应在实验结束后进行。

培养基：一般采用胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）或含有中和剂的TSA，当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。

培养时间：      ，    ChP(2015)      ，        GB/T16293-2010

TSA:          ，        3-5天       ，       不少于2天

SDA：        ，         5-7天      ，         不少于5天

3、监测频次及监测项目

参考GMP(2010)及GB50073-2013，见表2

检测频次的调整

如果出现连续超过纠偏限和警戒限、关键区域内发现有污染存在，空气净化系统进行任何重大的维修、消毒规程的更改、设备有重大维修或增加、洁净区（市）结构或区域分布有重大的变动、引起微生物污染的事故、日常操作记录反映出倾向性的数据时应考虑修改监测频次。

4、监测标准参考GMP（2010），见表3、表4

5、警戒限和纠偏限（参考FDA，见表5）

药品洁净实验室应根据历史数据，结合不同的洁净区域的标准，采用适当的方法，制定适当的微生物监测警戒限和纠偏限。一般可依据历史数据的平均值制定警戒限和纠偏限。限度确定后，应定期回顾评价，如历史数据表明环境有所改善，限度应作出相应的调整以反映环境实际质量状况。表5列出了个级别洁净环境微生物纠偏限参考值。

6、数据分析及偏差处理参考USP（35）

（1）数据分析

应当对日常环境监测的数据进行分析和回顾，通过搜集的数据和趋势分析，总结和评估无菌生产环境或洁净实验室是否受控，评估警戒限和纠偏限是否合适，评估所采取的纠偏措施是否合适。

应当正确评估微生物污染，不仅仅关注微生物数量，更应关注微生物污染检出的频率，往往在一个采样周期内同一环境中多点发现微生物污染，可能预示着风险增加，应仔细评估。几个位点同时有污染的现象也可能由不规范的采样操作引起，所以在得出环境可能失控的结论之前，应仔细回顾采样操作过程。在污染后的几天对环境进行重新采样对于调查污染原因意义不大，应为采样过程不具有可重复性。

（2）偏差处理

当微生物监测结果超出纠偏限度时，应当按照偏差处理规程进行报告，记录，调查，处理以及采取纠正措施，并对纠正措施的有效性进行评估。

7、微生物鉴定

建议对受控环境收集到的微生物进行适当水平的鉴定，微生物菌群信息有助于预期常见菌群，并有助于评估清洁/消毒规程、方法、清洁/消毒剂及微生物检测方法的有效性，尤其当超过监测限度时，微生物鉴定信息有助于污染源的调查。关键区域分离到的菌落应先于非关键区域进行鉴定。微生物鉴定参照“通则9204《微生物鉴定指导原则》进行”。